HIV-1 CRF07＿BC亚型gp140探针的构建及特异性B细胞分选与单克隆中和抗体制备

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的构建用于膜蛋白特异性B细胞分选的BC亚型gp140分子探针(CN54 gp140-Avi),从我国1型艾滋病病毒(HIV-1)感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中分选特异性记忆B细胞进而获得单克隆抗体,并鉴定其生物特性。方法利用聚合酶链反应(PCR)方法构建特异性分子探针(CN54 gp140-Avi),并进行生物素化,利用该探针分选特异性记忆B细胞克隆,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增出IgG的轻重链可变区基因,并克隆入表达载体,共转染293F细胞后获得抗体,检测抗体的中和活性。结果成功构建出CN54 gp140-Avi生物素化分子探针,利用该分子探针从HIV-1 BC亚型感染者PBMCs中分离得到单克隆抗体CBJB363-B4,B4抗体重链来源于IGHV1-3*01F家系,轻链为Lambda链,属于IGLV1-40*01F家系,体细胞突变率均较低。B4抗体可以很好地结合CN54 gp140蛋白。该抗体可以有效中和MW965、X2278、398-F1毒株。结论成功制备出具有生物学活性的CN54 gp140-Avi探针,并获得具有中和活性的单克隆抗体。利用该分子探针,未来有望获得较多更强中和能力的抗体,为开发艾滋病抗体药物和基础疫苗学研究等领域提供新的工具和思路。

【关键词】 分子探针 1型艾滋病病毒 单克隆抗体 中和活性

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